要判断样本含有人、狗还是猪的DNA,不能靠颜色、气味或肉眼观察,需要提取DNA并检测物种特异性遗传标记。最直接的做法是送实验室进行人、犬、猪多重PCR或实时荧光定量PCR:检测信号对应哪一种物种,就报告检出哪一种;如果样本可能混有多种来源,应选择能够同时检测多物种的方案。
先确定要回答的问题
检测前先把目标说清楚:是确认样本属于人、狗或猪中的哪一种,还是要检查其中是否混有猪源成分,抑或需要确认多种DNA是否同时存在。这些问题需要的检测范围不同。只想做物种筛查,通常可询问实验室是否有针对人、犬、猪的物种特异性检测;如果样本可能来自其他动物,需增加相应物种靶标,不能把“未检出人、犬、猪”直接理解成“没有动物DNA”。
DNA的化学结构在不同物种间相同,差别在于遗传序列。实验室选择能区分目标物种的短片段进行扩增和检测。人、犬、猪各自有对应的靶标;检测多个靶标时,可比较每个靶标是否出现特定信号。具体采用哪段序列、检测限是多少,应以实验室验证过的试剂和方法为准。
按“取样—送检—判读”完成检测
- 取样前确认样本类型。提前告知实验室样本是组织、肉类、液体、拭子还是其他材料,以及是否经过烹煮、腌制、加工或长时间存放。不同样本的取样和保存要求不一样,先按检测机构提供的容器与说明操作,不要自行混装或添加不明保存液。
- 避免样本交叉污染。处理不同样本时分开使用洁净工具,戴一次性手套;不要让样本接触其他肉类、宠物用品或已使用过的棉签。若要判断表面残留,可按实验室要求用拭子采样;若要判断一块材料本身的成分,通常应按其要求取内部代表性部分。样本不必越多越好,关键是取样位置符合检测目的。
- 选择适合的检测方法。人、犬、猪三类同时筛查,可询问多重PCR或实时荧光定量PCR。PCR通过扩增特定DNA片段判断相应靶标是否存在,适合明确列出目标物种的检测。若结果异常、样本成分未知,或需要进一步确认物种,可询问是否采用测序等方法复核。单纯观察DNA提取液,无法分辨它来自人、狗还是猪。
- 查看报告的检测范围和质控。报告应说明检测了哪些物种、采用何种方法、结果如何,以及阴性、阳性和提取过程控制是否有效。质控不合格时,结果可能需要重做;不能只看一行“阴性”就忽略检测项目和样本情况。
结果该怎么理解
如果犬靶标阳性、猪和人靶标阴性,通常表示该次检测在样本中检出了犬DNA,未检出所列的另外两类靶标。这里的“未检出”不等于绝对不存在:含量太低、DNA降解、取样不具代表性,或样本中存在影响扩增的物质,都可能影响检出。实验室的检测限和质控结果有助于判断阴性结论是否可靠。
若人、犬、猪多个靶标同时阳性,说明样本中检测到了多个来源的DNA信号,但不能仅凭阳性个数判断各自占比,也不能确定它们是混合在样本中,还是在采集、加工或操作时发生了交叉接触。需要判断混合比例时,应另行询问是否有经过验证的定量方法;若要追溯具体个体,普通物种筛查也不够,需要符合目的的个体识别检测。
加工食品或经过加热的样本可能只剩较短、较少的DNA片段,检测结果会受加工程度影响。遇到这种情况,应在委托时说明样本处理过程,并确认检测方案是否适用于加工样本。若检测未出结果、内控失败或不同方法结论不一致,先按实验室建议重新取样或复核,不宜自行把结果解释成某一物种的确定来源。
委托时可直接这样说明
提交样本时,可以明确提出:“请检测样本中是否含有人、犬和猪的DNA;如可能存在混合来源,请说明能否同时筛查,并在报告中列出检测范围、方法和质控结果。”再补充样本类型、加工情况及取样位置。这样实验室更容易判断应使用物种筛查、复核测序还是其他方案,也能让最终结果对应你真正要确认的问题。
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